硝呋索尔ELISA试剂盒

一、 原理  本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的硝呋索尔，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的硝呋索尔和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗硝呋索尔衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的硝呋索尔含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出硝呋索尔含量。 二、 试剂盒技术指标：试剂盒灵敏度：  0.1ppb样本检测下限：组织、蜂蜜         0.2ppb鱼/虾等水产品组织因存在一定的干扰，检测下限为0.3ppb回收率：鱼/虾水产组织    90%±15%蜂蜜/鸡肉/肝脏样本  80%±15%交叉反应率：硝呋索尔代谢物  100%呋喃唑酮代谢物  ﹤0.1%呋喃妥因代谢物﹤0.1%呋喃西林代谢物﹤0.1% 三、试剂盒组成1．微量测试孔：96T/8孔2．标准品液： 0ppb  0.1 ppb  0.3ppb  0.9ppb  2.7ppb  8.1ppb （1ml/瓶）3．酶标记物                12ml4．抗体工作液              7ml5．底物缓冲液              7 ml6．底物液                  7 ml7．终止液                  7 ml8．20倍浓缩洗涤液         50 ml9．复溶液                  50 ml10．15.1mg衍生化试剂 四、 所用仪器、试剂具备的仪器：  微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g） 微量移液器：  单道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl试       剂：  甲醇、氢氧化钠、乙酸乙酯、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾（K₂Fe（CN）₅·NO·3H₂O）ZnSO₄·7H₂O 五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理需配制：1．衍生化试剂 称15.1mg邻硝基苯甲醛加甲醇10ml溶解(浓度10mM)2．C液：（供奶样用）称12.5g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100ml。      D液：（供奶样用）称29.8g 硫酸锌用去离子水溶解定溶至100ml。3．0.1M K₂HPO₄ 称22.8g K₂HPO₄·3H₂O加去离子水溶解定溶至1L4．1M HCl取8.6ml浓HCl加水定溶至100ml。5．1M NaOH称取4g NaOH加水定溶至100ml。样本的处理(a) 肉样或鱼虾用均质器均质样本,接（d）的描述方法(b) 奶样1. 取出5ml的奶样本到玻璃离心管中,分别加入C液和D液各250μl。2. 用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000r/min以上离心10min(4-12℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8℃,然后离心。3. 接(d)的描述方法(c) 蜂蜜  1. 取1±0.05g样本到离心管中。2. 加入4ml的去离子水溶解,再加入0.5ml 1M HCl和100μl衍生化试剂,充分振荡。3. 接(d)第2步描述方法(d)接上面的方法1. 取1±0.05g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1ml（相当1ml奶样），分别加入4ml的去离子水，0.5ml 1M HCl和100μl衍生化试剂，充分振荡。2. 置于56℃环境中孵育（2h）。3. 分别加入5ml 0.1M K₂HPO_4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯，充分振荡30s；4. 在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。5. 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一洁净容器中于50℃氮气/空气吹干。    6. 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀释好的复溶液充分混合；在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。7. 取50μl下层相用于分析。样本稀释倍数：2