猪圆环病毒Ⅱ型IgG抗体试剂盒（酶联免疫法）

【预期用途】 本试剂盒用于检测猪血清中猪圆环病毒抗体。评估猪场猪圆环苗免疫状况，感染猪的血清学诊断。 【原    理】本试剂盒系由预包被猪圆环病毒Ⅱ型（PCVⅡ）CAP重组蛋白的微孔板和酶标记二抗及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清或血浆中猪圆环病毒Ⅱ型特异性抗体。实验时，在包被板中加入对照血清和稀释的待检血清，经温育后，若样品中含有猪圆环病毒Ⅱ型的特异性抗体，则将与包被板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与包被板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有特异性抗体。 【试剂盒组成】

1.	猪圆环病毒Ⅱ型抗原预包被微孔板条	96T×1
2.	酶标记物  (红盖)	11ml×1
3.	样品稀释液  (黄盖)	25ml×1
4.	20X浓缩洗涤液  (透明盖)	20ml×1
5.	底物液A  (白盖)	6ml×1
6.	底物液B  (黑盖)	6ml×1
7.	终止液  (黄盖)	6ml×1
8.	阳性对照 (红盖，已灭活)	0.5ml×1
9.	阴性对照 (绿盖，已灭活)	0.5ml×1
10.	盖板膜	1张
11.	自封袋	1个
12.	说明书	1份

                  【样品制备】  取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品短期可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。 【样品稀释】  用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清加入195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
 【洗涤液配制】浓缩洗涤液使用前应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。
 【试验操作方法】1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。2.取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照血清100μl；样品孔每孔加入稀释后的血清样本100μl；空白对照孔不加。4.混匀，置37℃反应30分钟。5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。6.每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。置37℃反应30分钟。7.洗涤，同步骤5。8.每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。9.每孔加终止液50μl，混匀，用空白孔调零，于450nm(630nm作参比波长）测定各孔吸光值（A450）。 【结果判定】定义：N=阴性对照孔平均A值；P=阳性对照孔平均A值；S=样品孔A值；S/P=样品孔A值/阳性对照孔平均A值。1.正常情况下，N≤0.10，P≥0.50。2.S/P≥0.18时判为阳性，S/P＜0.15时判为阴性，0.15≤S/P＜0.18时判为可疑。当本实验结果为阴性或可疑时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。 【试验方法的局限性】该试验仅作为定性检测猪圆环病毒Ⅱ型IgG抗体。 【注意事项】1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。3.微孔板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的微孔板需放入有干燥剂的密封袋中保存(包被板开封后请于2～8℃避光保存，使用期限为1个月)4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。6.用于检测的样品应保持新鲜。7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。8.不同批号试剂组分不得混用。 【储  存】原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。 【有效期】有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。