在线固相萃取仪将萃取净化和HPLC 分析结合进行, 可用于水样的直接分析。它和多功能样品处理仪的一个主要不同在于多功能样品处理仪可以每个样品换一个SPE 柱, 而在线固相萃取仪是数十个样品共用一个SPE 柱。
1. 工作原理
在线固相萃取仪通过切换阀和注射泵将样品引入萃取柱, 再从萃取柱转入HPLC 分析柱。如果采用离线萃取, 样品只有约1%可以注入HPLC。而采用在线萃取, 样品是全部注入HPLC。因此在线萃取使用20 毫升样品就可以达到离线萃取2000 毫升同样的灵敏度。
2. 应用
以下是使用在线固相萃取直接分析水中苯并(a)芘的例子。通过将样品前处理和仪器分析结合，每个样品的分析时间可由1小时以上缩短为10分钟（包括样品前处理和仪器分析），灵敏度可达到ppq 级（part per quadrillion; pg/L）。
液相色谱:
流动相: 甲醇; 流速: 1.5 毫升／分; 分析柱：PCTsil C18, 4.6x250mm, 5微米; 柱温: 室温；检测波长: 254 纳米；分析停止时间: 9 分钟。在此条件下苯并(a)芘 的保留时间为5.5 分钟。
固相萃取:
固相萃取柱: Trap N, 4.6x10mm, PromoChrom Technologies; 注射泵流速: 6毫升／分； 处理步骤: 1) 加样20~40 毫升，2) 用2 毫升异丙醇＋水(10:90）洗固相萃取柱，3) 进样并触发液相色谱分析。
含25 ppt 苯并(a)芘的水样获得的信噪比为93(S/N=0.58/0.0062)。 由此推算,该方法的定量限(quantitation limit)为3 ppt。如果使用荧光检测器, 灵敏度可提高50~100 倍, 进入ppq 级。另外荧光检测器具有更好的选择性, 有助于减少假阳性结果。浓度为2.5 ppb 的水样连续分析3 次, 所得变异系数为0.86%, 显著优于采用离线萃取的结果。